PRACTICAS FORMATIVAS BACTERIOLOGIA Y L.C

El programa de Bacteriología y Laboratorio Clínico de La Universidad de Santander UDES-CUCUTA le brinda a todos los estudiantes de Prácticas Formativas un cordial saludo de BIENVENIDA y les desea muchos éxitos en esta nueva etapa de su formación profesional.

martes, 4 de febrero de 2014

CORRELACIÓN CLINICA 2014 A CASO CLÍNICO RESISTENCIA ANTIMICROBIANA

47 comentarios:

  1. Buenas tardes, apreciados estudiantes por favor agregar las respuestas a través de un comentario, Gracias

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  2. Katherin J. Perez Pineda codigo: 10172005

    1ra: A Klebsiella pneumoniae



    2da: c) Carbapenemasa, BLEE



    3ra: c) cefepime, meropenem



    4ta:



    método de E-test (Epsilometer-test) (AB Biodisk, Suecia) se utilizan tiras de material no poroso, que contiene el antimicrobiano en estudio y el antimicrobiano combinado con ácido cluvulánico en un gradiente de concentración, lo que permite determinar la Concentraccion minima inhibitoria (CIM). Para ello se prepa un inóculo estandarizado, igual que para la determinación de susceptibilidad por el método de difusión de disco. Seguidamente se procede a colocar las tiras de E-test que contenían la combinación de CAZ y CAZ/ácido clavulánico; también se utilizó la tira de CTX y CTX/ácido clavulánico . La CIM sedeterminada en el punto en que la elipse de inhibición intercepta la escala de la tira. Para confirmar la producción de BLEE se obtiene la razón de dividir la CIM del antimicrobiano solo por la CIM del antimicrobiano con ácido clavulánico; si esta razón es igual a 8, se confirma la producción de BLEE

    5ta: d) plasmidos

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    1. La respuesta 1 de identificación esta bien pero las otras respuestas corresponde a un mecanismo de enzimas inactivantes de Ampc son susceptibles al Cefepime y geneticamente la expresión es inducible que se define como producida por el estimulo y el test confirmatorio corresponde al ácido fenilborónico.

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    2. El microorganismo es una K.pneumoniae con un mecanismo de resistencia de un Ampc ya que es sensible al cefepime su confirmación se realiza con ácido fenil borónico y lo adquiere solo por un estimulo por lo tanto su expresión genética es inducible por no presentar ese mecanismo.

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    1. Geomar Jesus Maldonado S. codigo: 10172032

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    2. 1ra: A Klebsiella pneumoniae

      2da: b) Cefalosporinasas, Carbapenemasa,

      3ra: c) cefepime (sensible), meropenem (resistente)

      4ta: El Test de Hodge modificado se realiza para confirmar que el mecanismo de resistencia de la bacteria a los antimicrobianos del grupo carbapenémicos es debido a la presencia de la enzima carbapenemasa.

      Fundamento:
      Capacidad que tiene la enzima (Carbapenemasa) de hidrolizar al antimicrobiano favoreciendo así el crecimiento de ésta e inhibiendo el efecto del mismo.

      Técnica:
      A partir de una cepa control de E. coli ATCC 25922
      Realizar una suspensión 0.5 Mac Farland de la cepa control (E. coli ATCC 25922).
      Hacer una dilución 1/10 de dicha suspensión en agua destilada o solución salina.
      Inocular con ella una placa de Mueller-Hinton siguiendo las recomendaciones para técnica de difusión en disco.
      Colocar en el centro de la placa un disco de Imipenem (10 microgramos).
      Con un asa estéril tome de 3 ó 4 colonias de la muestra objeto de estudio y realice una estría desde el borde a la placa hacia el centro de la misma sin llegar a tocar el disco de IMP.
      Incubar en aerobiosis a 37ºC / 24 horas
      Es conveniente realizar junto a la muestra controles positivos negativos.
      En una misma placa no se recomienda realizar más de 5 ensayos.

      Interpretación de los resultados:
      Positivo: Un resultado positivo se pondrá de manifiesto por el crecimiento de la cepa E. coli ATCC 25922 en la parte de intersección entre el halo de inhibición que genera la difusión del antibiótico y la estría de la cepa que era objeto de nuestro estudio, formándose así una hendidura en la parte próxima al disco. Ésto pone en evidencia la presencia de carbapenemasas en la cepa problema que han sido liberadas al medio permitiendo así el crecimiento de E. coli.

      5ta: c: inducible/constitutiva

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    3. El microorganismo es una K.pneumoniae con un mecanismo de resistencia de un Ampc ya que es sensible al cefepime su confirmación se realiza con ácido fenil borónico y lo adquiere solo por un estimulo por lo tanto su expresión genética es inducible por no presentar ese mecanismo

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    1. 1. a) Klebsiella pneumoniae

      2. b) Cefalosporinasas, Carbapenemasa,

      3. c) cefepime y meropenem

      4. Test de Hodge modificado
      Las carbapenemasas representan la familia más versátil de betalactamasas, estas enzimas tienen la habilidad de hidrolizar carbapenems y todos los betalactámicos de uso clínico. Las enzimas carbapenemasas han sido detectadas tanto en plásmidos como en cromosomas. Estas carbapenemasas se pueden difundir rápidamente debido a su localización en el plásmido, lo cual hace que el tratamiento de las infecciones causadas por estos microorganismos sean extremadamente difíciles debido a su multirresistencia.
      Prueba de tamizaje:

      Esta prueba se realiza a las bacterias pertenecientes a Enterobacteriaceae cuando se observa en una prueba de tamizaje:

      Resistencia a una o más cefalosporinas de tercera generación (cefoperazone, cefotaxime, ceftazidime, ceftizoxime y ceftriaxone) y algunos carbapenémicos.
      El procedimiento de tamizaje se realiza de acuerdo a las recomendaciones generales para las pruebas de difusión en disco o la microdilución, se incuba a 35ºC durante 16-18 horas. Pasado el tiempo de incubación deben leerse las zonas de inhibición del lado del agar usando luz reflejada.

      En caso de presentarse los diámetros de inhibición mencionados anteriormente debe realizarse la prueba confirmatoria.

      Prueba confirmatoria

      La prueba confirmatoria se realiza de acuerdo a las siguientes recomendaciones:
      -Prepare una suspensión de una cepa de E. coli ATCC 25922, realice una suspensión 0.5 Mcfarland y haga una dilución 1:10 en agua destilada o solución salina
      -Extienda el inóculo sobre la superficie del agar Mueller-Hinton siguiendo las recomendaciones del CLSI para las pruebas de rutina de difusión en disco.
      -Coloque un disco de meropenem en el centro del agar
      -Tome de 3 a 5 colonias de un cultivo fresco del microorganismo a probar y realice una estría desde el borde del disco hacia la periferia, la longitud puede ser de 20-25 mm
      -Incube a 35ºC en aerobiosis durante 16-18 horas

      5.c) inducible/constitutiva

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    2. Raquel Y. Caballero Sanchez (10172019)

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    3. El microorganismo es una K.pneumoniae con un mecanismo de resistencia de un Ampc ya que es sensible al cefepime su confirmación se realiza con ácido fenil borónico y lo adquiere solo por un estimulo por lo tanto su expresión genética es inducible por no presentar ese mecanismo.

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    1. 1ra: A) Klebsiella pneumoniae

      2da: b) Cefalosporinasas, Carbapenemasa,

      3ra: c) cefepime (sensible) lo cual indica que no posee BLEE, meropenem (resistente) lo cual indica la posible presencia de una carbapenemasa.

      4ta: Test de Hodge modificado:
      Esta prueba se realiza a las bacterias pertenecientes a Enterobacteriaceae cuando se observa en una prueba de tamizaje:

      Resistencia a una o más cefalosporinas de tercera generación (cefoperazone, cefotaxime, ceftazidime, ceftizoxime y ceftriaxone)

      a prueba confirmatoria se realiza de acuerdo a las siguientes recomendaciones:

      -Prepare una suspensión de una cepa de E. coli ATCC 25922, realice una suspensión 0.5 Mcfarland y haga una dilución 1:10 en agua destilada o solución salina

      -Extienda el inóculo sobre la superficie del agar Mueller-Hinton siguiendo las recomendaciones del CLSI para las pruebas de rutina de difusión en disco

      -Coloque un disco de meropenem en el centro del agar

      -Tome de 3 a 5 colonias de un cultivo fresco del microorganismo a probar y realice una estría desde el borde del disco hacia la periferia, la longitud puede ser de 20-25 mm

      -Incube a 35ºC en aerobiosis durante 16-18 horas

      5ta: c) inducible-constitutiva

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    1. 1ra: A Klebsiella pneumoniae

      2da: b) Cefalosporinasas, Carbapenemasa,

      3ra: c) cefepime (sensible), meropenem (resistente)

      4ta:
      Test de Hodge Modificado.
      Se prepara una suspensión 0.5 McFarland de una E.coli ATCC 25922.
      Se diluye 1:10 en salino o caldo.
      Se siembra como en kirby bauer una placa de MH.
      Secar por 3 – 10 minutos.
      Colocar el disco de carbapenemico.
      Con una asa o torula estéril, sembrar en una linea recta nuestra cepa en estudio, desde el borde hacia el disco.
      Luego de la incubación, observar un mayor crecimiento en la línea de la cepa en estudio, en donde se intercepta la línea de prueba y la zona de inhibición.

      Si hay un mayor crecimiento, el test es positivo, para carbapenemasas.

      5ta: c: inducible/constitutiva


      Jesmar Alexandra Lopez Torres 10172015

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    2. El microorganismo es una K.pneumoniae con un mecanismo de resistencia de un Ampc ya que es sensible al cefepime su confirmación se realiza con ácido fenil borónico y lo adquiere solo por un estimulo por lo tanto su expresión genética es inducible por no presentar ese mecanismo.

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    1. Yolanda Di Froscia Gutierrez 10172012

      comentario:
      1
      R: Según la batería bioquímica estos resultados pertenecen a klebsiella pneumoniae
      2
      R: El mecanismo que este microorganismo tiene es la opción (b) Cefalosporinasas, Carbapenemasa,
      3
      R: Es indicativo de la opcion (c) cefepime(sensible), meropenem(resistente).
      .
      4
      R: Test de Hodge modificado
      Esta prueba se realiza a las bacterias pertenecientes a Enterobacteriaceae cuando se observa en una prueba de tamizaje:

      Resistencia a una o más cefalosporinas de tercera generación (cefoperazone, cefotaxime, ceftazidime, ceftizoxime y ceftriaxone) y algunos carbapenémicos.
      El procedimiento de tamizaje se realiza de acuerdo a las recomendaciones generales para las pruebas de difusión en disco o la microdilución, se incuba a 35ºC durante 16-18 horas. Pasado el tiempo de incubación deben leerse las zonas de inhibición del lado del agar usando luz reflejada.
      5
      R: inducible/constitutiva

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    2. El microorganismo es una K.pneumoniae con un mecanismo de resistencia de un Ampc ya que es sensible al cefepime su confirmación se realiza con ácido fenil borónico y lo adquiere solo por un estimulo por lo tanto su expresión genética es inducible por no presentar ese mecanismo.

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  9. yessica paola rios 08171007

    1. (A) klebsiella pneumonia

    2.(C) carbapenemasa,BLEE

    3. (C) Cefepime, meropenem

    4.Método E test
    La prueba E test determina la susceptibilidad de forma cuantitativa, se basa en el uso de unas tiras o "epsilómetros" (AB Biodisk, Sweden) las cuales contienen un gradiente exponencial continuo de antibiótico y una escala interpretativa. El gradiente de antibiótico cubre un amplio rango de concentraciones correspondientes aproximadamente a 15 diluciones dobles de CIM. Estas concentraciones están diseñadas para corresponder con los puntos de corte correspondientes a cada antimicrobiano.
    El procedimiento es exactamente igual al usado en el método de difusión en disco pero en vez de observar una zona circular de inhibición, se observa una zona elíptica. La CIM del antibiótico se
    determina en el punto donde la elipse de crecimiento bacteriano intercepta la escala de concentración de la tira.

    Este método tiene en cuenta varios factores para la calidad de la prueba:

    •Medio de cultivo:
    El medio debe tener una profundidad de 4mm. Un pH de 7,3±0,1. El uso de suplemento en el medio de cultivo depende del microorganismo a probar.

    •Turbidez del inóculo
    El inoculo del microorganismo es ajustado al 0.5 McFarland para la mayoría de los microorganismos a excepción de los germenes anaerobios que se ajusta al 1 de McFarland.

    •Tiras de E test
    El inoculo debe ser extendido sobre el agar, la superficie debe estar completamente seca antes de colocar las tiras del antimicrobiano

    5.(d) Plasmidos

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  10. 1. A) Klebsiella pneumoniae
    2. C) Carbapenemasa, BLEE
    3. C) cefepime y meropenem
    4. prueba confiermatoria BLEE en enterobacterias:
    *Tiras de E-test para detección de BLEE: CTX-CTC y CAZ-CCV.
    Representa una sofisticada combinación de los métodos descritos anteriormente. El E-test es más simple que otros métodos para obtener una CIM. Utiliza una tira de plástico que contiene concentraciones crecientes de un determinado antibiótico que van desde 0,016 ug/ml hasta 256 ug/ml/ Esta tira se pone sobre una placa de agar que ha sido inoculada con el organismo en estudio. Después de incubar la placa por 16 a 18 horas, se forma un área de inhibición de forma elíptica, en la cual la concetración inhibitoria mínima puede ser leída directamente. Este es el método de elección para hacer estudios de susceptibilidad en gérmenes problemáticos o con requerimientos especiales, como por ejemplo Enterobacterias, Streptococcus pnemoniae, Streptococcus pyogenes, Haemophilus influenzae y gérmenes anaeróbicos.

    5. D) plasmidos

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  11. 1ra: A) Klebsiella pneumoniae

    2da: b) Cefalosporinasas, Carbapenemasa,

    3ra: c) cefepime es sensible, lo cual indica que no posee BLEE, meropenem es resistente o cual indica la posible presencia de una carbapenemasa.

    4.Test de Hodge modificado:
    El Test de Hodge modificado se realiza para confirmar que el mecanismo de resistencia de la bacteria a los antimicrobianos del grupo carbapenémicos es debido a la presencia de la enzima carbapenemasa.

    Test de Hodge modificado
    El Test de Hodge modificado se realiza para confirmar que el mecanismo de resistencia de la bacteria a los antimicrobianos del grupo carbapenémicos es debido a la presencia de la enzima carbapenemasa.

    Fundamento:
    Capacidad que tiene la enzima (Carbapenemasa) de hidrolizar al antimicrobiano favoreciendo así el crecimiento de ésta e inhibiendo el efecto del mismo.
    La técnica se lleva a cabo de la siguiente manera:
    A partir de una cepa control de E. coli ATCC 25922
    Realizar una suspensión 0.5 Mac Farland de la cepa control (E. coli ATCC 25922).
    Hacer una dilución 1/10 de dicha suspensión en agua destilada o solución salina.
    Inocular con ella una placa de Mueller-Hinton siguiendo las recomendaciones para técnica de difusión en disco.
    Colocar en el centro de la placa un disco de Imipenem (10 microgramos).
    Con un asa estéril tome de 3 ó 4 colonias de la muestra objeto de estudio y realice una estría desde el borde a la placa hacia el centro de la misma sin llegar a tocar el disco de IMP.
    Incubar en aerobiosis a 37ºC / 24 horas
    Es conveniente realizar junto a la muestra controles positivos negativos.
    En una misma placa no se recomienda realizar más de 5 ensayos.

    Interpretación de los resultados:
    Positivo: Un resultado positivo se pondrá de manifiesto por el crecimiento de la cepa E. coli ATCC 25922 en la parte de intersección entre el halo de inhibición que genera la difusión del antibiótico y la estría de la cepa que era objeto de nuestro estudio, formándose así una hendidura en la parte próxima al disco. Ésto pone en evidencia la presencia de carbapenemasas en la cepa problema que han sido liberadas al medio permitiendo así el crecimiento de E. coli.
    Negativo: No se presenta crecimiento de E.coli en el punto de intersección de la estría de la cepa problema y el halo del inhibición del antimicrobiano, es decir, se aprecia un halo de inhibición perfecto alrededor del disco.

    5. c) inducible/constitutiva

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  12. 1. Según los resultados de la bioquímica con sus características, la muestra biológica, y el resultado del antibiograma el microorganismo corresponde a:
    RTA: A. Klebsiella pneumoniae

    2. De los siguientes mecanismos cual(es) presenta el microorganismo resistencia antimicrobiana:
    RTA: C. carbapenemasa , BLEE

    3. Cuáles son los antibióticos indicativos que representa el mecanismo de la resistencia antimicrobiana a. Cefalosporinas de tercera generación como:
    RTA: C. cefepime y Meropenem.

    4. Nombre si hay otra prueba que detecte o confirme el mecanismo de resistencia:
    RTA: Etest: proporcionando un test de escala de CMI para todos los laboratorios de microbiología

    Etest es un método para realizar tests de resistencia antimicrobiana bien establecido en los laboratorios de microbiología de todo el mundo. Consta de un gradiente predefinido de concentraciones de antibiótico sobre una tira de plástico. Se usa para determinar la escala de concentraciones mínimas inhibitorias (CMIs) de antimicrobianos, algunos antífúngicos y antimicobacterianos.

    5. De las siguientes expresiones cuál es la que utilizo la bacteria para presentar el mecanismo de resistencia
    RTA: D. plasmidos

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  13. NOMBRE: LLANERYZ AMAYA PEREZ .

    1. Según los resultados de la bioquímica con sus características, la muestra biológica, y el resultado del antibiograma el microorganismo corresponde a:

    A. Klebsiella pneumoniae

    2. De los siguientes mecanismos cual(es) presenta el microorganismo resistencia antimicrobiana:

    C. carbapenemasa , BLEE

    3. Cuáles son los antibióticos indicativos que representa el mecanismo de la resistencia antimicrobiana a. Cefalosporinas de tercera generación como:

    C. cefepime y Meropenem.

    4. Nombre si hay otra prueba que detecte o confirme el mecanismo de resistencia:

    test de hodge.

    5. De las siguientes expresiones cuál es la que utilizo la bacteria para presentar el mecanismo de resistencia

    C:inducible- constitutiva

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  14. 1: A.- Klebsiella pneumoniae.

    2: C.- Carbapenemasas y BLEE.

    3: C.- Cefepime y Meropenem.
    Cefepime es una cefalosporina de 4ta generación, la bacteria presenta sensibilidad lo cual podemos decir que este microorganismo presenta mecanismo de resistencia BLEE ya que este solo confiere resistencia a las cefalosporinas de 3era generación las cuales si se encuentran resistente en el antibiograma del paciente. El Meropenem se encuentra Resistente lo que nos indica que pueden haber presencia de las Carbapenemasas.

    4: La técnica de difusión con disco:
    La presencia de una BLEE puede sospecharse no solo por la resistencia o disminución de los halos de inhibición de algunos o todos los sustratos sino también por el efecto sinérgico producido entre las cefalosporinas de espectro ampliado o los monobactámicos y el ácido clavulánico, cuando previamente se han situado de forma estratégica los discos.
    Otras pruebas que también nos permiten confirmar el mecanismo de resistencia BLEE son:
    • Discos combinados de cefalosporinas con ácido clavulánico.
    • La técnica de difusión en gradiente (Etest) con tiras combinadas de cefalosporinas con y sin inhibidor.

    5: C.- Inducible - Constitutiva.


    LILIAN MONTAÑEZ
    CODIGO: 10172014

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  15. 1. A
    2. C
    3. C. Cefepime ( sensible) Meropenem ( resistente)
    4. Para confirmar el mecanismo de resistencia de K. pneumaniae existe el test modificado de Hodge.
    Este test se realiza según las CLSI cuando la cefotaxime, cefriaxona, ceftazidime son RESISTENTES (Cefepime muestra resultados variables cuando hay producción de carbapenemasas).
    La prueba confirmatoria se realiza de acuerdo a las siguientes recomendaciones:
    -Prepare una suspensión de una cepa de E. coli ATCC 25922, realice una suspensión 0.5 Mcfarland y haga una dilución 1:10 en agua destilada o solución salina
    -Extienda el inóculo sobre la superficie del agar Mueller-Hinton siguiendo las recomendaciones del CLSI para las pruebas de rutina de difusión en disco
    -Coloque un disco de meropenem en el centro del agar
    -Tome de 3 a 5 colonias de un cultivo fresco del microorganismo a probar y realice una estría desde el borde del disco hacia la periferia, la longitud puede ser de 20-25 mm
    -Incube a 35ºC en aerobiosis durante 16-18 horas.
    INTERPRETACIÓN
    Positivo: Un resultado positivo se evidencia por el crecimiento de la cepa ATCC de E.coli en la parte de intersección entre el halo de inhibición generado por la difusión de antibiótico y la estria de la cepa problema formando una hendidura en la parte proximal al disco. Esto indica la presencia de carbapenemasas en la cepa problema que son liberadas al medio y permiten el crecimiento de E.coli.
    Negativo: No se presenta crecimiento de E.coli ATCC en el punto de intersección de la estria de la cepa problema y el halo de inhibición generado por el carbapenem.
    5. D. Resistencia adquirida por plásmidos localizada en el gen blakpc
    Estudiante: Himelda Mercedes Quintero Pacheco
    codigo:10172016

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  17. 1 A) Klebsiella pneumoniae
    2 C) carbapenemasa- BLEE
    3 C) cefepime- meropenem
    4 Según un articulo "COMPARACIÓN DE CUATRO MÉTODOS FENOTíPICOS PARA LA DETECCIÓN DE bETA-LACTAMASAS DE ESPECTRO EXTENDIDO" publicado en el 2010.
    las muestras usadas fueron 147 cultivos positivos para E. coli, Klebsiella pneumoniae y Proteus mirabilis iniciando la pruebas de tamizaje (método de difusión) las muestras sospechosas fueron sometidas a pruebas confirmatorias como el método americano, el método de Jarlier, el método de Hogde y el método tridimensional.
    El método americano es considerado como el patrón oro para la detección de las BLEE, emplea los mismo materiales y procedimientos que un antibiograma de rutina a igual que el método Jarlier que demostró ser tan sensible y especifico como el patrón de oro la única desventaja que presenta son las modificaciones de la ubicación y la distancia de los discos puede conducir a resultados erróneos en personal no experimentado.
    El método hogde y el tridimensional tiene una especificidad y sensibilidad puesto que son técnicas que requieren diferentes antibióticos su desventaja es que requiere una cepa de referencia aumentando los costos operativos de la prueba.
    Se concluye así en el estudio que el método que se recomienda para empleo es el Jarlier.

    pag de referencia: http://sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas/medicina_experimental/v27_n3/pdf/a06v27n3.pdf

    5 d) Plasmidos

    YURAI KATHERIN FERNANDEZ LEON / 10172004

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  18. 1. A. Klebsiella pneumoniae
    2. A. Betalactamasas de espectro extendido Ampc
    3. A. Cefalosporinas de tercera generación
    4. E test para la detección de BLEE
    Esta prueba utiliza tiras que contienen en una parte de ella diferentes concentraciones decrecientes de la cefalosporina (ceftazidima) y en la otra parte la misma cefalosporina con una concentración fija de ácido clavulánico. Las tiras deben ser colocadas en al agar Mueller Hinton siguiendo las recomendaciones de CLSI para el método de difusión en disco en cuanto a inoculo, tiempo y atmosfera de incubación.
    La CIM se determina observando el punto en que la elipse de inhibición intercepta la escala de la tira. Se lee el extremo del antibiótico sin el ácido clavulánico y el extremo que contiene ácido clavulánico, se divide las dos concentraciones en ese orden y un resultado positivo para BLEE es cuando la proporción es ≥8 y negativo<8.
    Cuando el crecimiento tiene lugar a lo largo de toda la tira y no se observa formación de la elipse de inhibición, la CIM será el valor superior que tiene la tira y por el contrario, cuando la elipse de inhibición se encuentre por debajo de la tira debe informar el valor mínimo de la escala.

    Prueba alternativa Doble disco para la detección de BLEE
    Este método de doble disco fue descrito por Jarlier en 1988 y consiste en la disposición de un disco convencional de amoxicilina/ácido calvulánico (20/10 µg) en el centro de una placa a una distancia de 20 mm se coloca un disco de ceftazima (30 µg) y al otro lado un disco de cefotaxima (30 µg). La ampliación de alguno de los halos de inhibición manifiesta la producción de la BLEE.
    Test tridimensional para detección de AmpC mediada por plásmido
    Esa prueba ha sido diseñada para la detección de β - lactamasas tipo BLEE y AmpC. Para esta prueba se utiliza un concentrado de células. La superficie del agar Mueller Hinton es inoculada con la cepa de E. coli ATCC 25922, se coloca un disco de cefoxitin de 30µg sobre el agar inoculado. Se hace una hendidura de 5mm sobre el agar desde el borde del disco en forma radial, dentro de la hendidura se coloca el extracto celular de la muestra. Si se observa un aumento del crecimiento del microorganismo en el punto donde se intercepta la hendidura con la zona de inhibición es considerado un resultado positivo de presencia de AmpC.
    Aunque las pruebas fenotípicas para BLEE nos permiten establecer la expresión de estas enzimas en los aislamientos, no nos permite determinar qué tipo de enzima BLEE poseen, siendo necesario el uso de técnicas moleculares para esta detección, de las cuales la reacción en cadena de la polimerasa PCR es considerada como el gold estándar para determinar que gen o genes bla del tipo BLEE (blaCTX-M, blaTEM, blaSHV o blaOXA) poseen los aislamientos en estudio (33), actualmente en la literatura hay descritos diferentes ensayos de PCR para esta detección, de los
    cuales la PCR multiplex son las más utilizadas ya que en un solo ensayo nos permite estudiar los diferentes genes que codifican enzimas BLEE (33-35), sin embargo para establecer que variante de las enzimas posee el aislamiento es necesario realizar secuenciación.
    5. Plásmidos

    JESSENIA ANDREA CEDEÑO PARALES COD, 10172010

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    1. El microorganismo es una K.pneumoniae con un mecanismo de resistencia de un Ampc ya que es sensible al cefepime su confirmación se realiza con ácido fenil borónico y lo adquiere solo por un estimulo por lo tanto su expresión genética es inducible por no presentar ese mecanismo.

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  19. 1.Según los resultados de la bioquímica con sus características, la muestra biológica, y el resultado del antibiograma el M.O corresponde a:
    a.Klebsiella pneumoniae
    2.La resistencia que presenta es:
    b.Cefalosporinasa y carbapenemasa
    3.Los antibióticos indicativos que representa el mecanismo a la resistencia antimicrobiana son:
    c.Cefepime y meropenem
    4.Una prueba confirmatoria del mecanismo de resistencia es :
    -Test de Hodge modificado se realiza con una suspensión de la cepa E. coli ATCC 25922 extendiendo el inoculo en agar Mueller-Hinton y se coloca un disco de Meropenem en el centro del agar, se toman colonias de un cultivo fresco del microorganismo a probar y realizar una estría desde el borde del disco hacia la periferia, se incuba a 37ºC
    -negativo: se observa halo de inhibición completo
    -positivo: halo de inhibición con muezca
    5.la expresión que utilizo la bacteria para expresar el mecanismo de resistencia es
    c. inducible- constitutiva

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  20. 1.A
    2.C
    3.C
    4.El Test de Hodge modificado se realiza para confirmar que el mecanismo de resistencia de la bacteria a los antimicrobianos del grupo carbapenémicos es debido a la presencia de la enzima carbapenemasa.

    Fundamento:
    Capacidad que tiene la enzima (Carbapenemasa) de hidrolizar al antimicrobiano favoreciendo así el crecimiento de ésta e inhibiendo el efecto del mismo.

    Interpretación de los resultados:
    Positivo: Un resultado positivo se pondrá de manifiesto por el crecimiento de la cepa E. coli ATCC 25922 en la parte de intersección entre el halo de inhibición que genera la difusión del antibiótico y la estría de la cepa que era objeto de nuestro estudio, formándose así una hendidura en la parte próxima al disco. Ésto pone en evidencia la presencia de carbapenemasas en la cepa problema que han sido liberadas al medio permitiendo así el crecimiento de E. coli.
    Negativo: No se presenta crecimiento de E.coli en el punto de intersección de la estría de la cepa problema y el halo del inhibición del antimicrobiano, es decir, se aprecia un halo de inhibición perfecto alrededor del disco.
    5.D plasmidos

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  21. 1. A
    2. C
    3. C
    4. Para confirmar mecanismo de resistencia de Klebsiella pneumoniae existe el Test de Hodge..
    Test de Hodge modificado:
    El Test de Hodge modificado se realiza para confirmar que el mecanismo de resistencia de la bacteria a los antimicrobianos del grupo carbapenémicos es debido a la presencia de la enzima carbapenemasa.

    Test de Hodge modificado
    El Test de Hodge modificado se realiza para confirmar que el mecanismo de resistencia de la bacteria a los antimicrobianos del grupo carbapenémicos es debido a la presencia de la enzima carbapenemasa.

    Fundamento:
    Capacidad que tiene la enzima (Carbapenemasa) de hidrolizar al antimicrobiano favoreciendo así el crecimiento de ésta e inhibiendo el efecto del mismo.
    La técnica se lleva a cabo de la siguiente manera:
    A partir de una cepa control de E. coli ATCC 25922
    Realizar una suspensión 0.5 Mac Farland de la cepa control (E. coli ATCC 25922).
    NTERPRETACIÓN
    Positivo: Un resultado positivo se evidencia por el crecimiento de la cepa ATCC de E.coli en la parte de intersección entre el halo de inhibición generado por la difusión de antibiótico y la estria de la cepa problema formando una hendidura en la parte proximal al disco. Esto indica la presencia de carbapenemasas en la cepa problema que son liberadas al medio y permiten el crecimiento de E.coli.
    Negativo: No se presenta crecimiento de E.coli ATCC en el punto de intersección de la estria de la cepa problema y el halo de inhibición generado por el carbapenem.
    5. Plasmidos

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  22. 1. a. Klepsiella pneumoniae

    2. d. AmpC

    3. c. Cefepime

    4. Prueba de Disco para AmpC:

    Esta prueba está basada en el uso de un disco que contiene Tris-EDTA para permeabilizar la célula de la bacteria y permitir la liberación de la β lactamasa al ambiente externo. Siguiendo las recomendaciones de CLSI para el método de difusión en disco se extiende sobre una placa de Mueller Hinton una cepa sensible a cefoxitin que es E. coli ATCC 25922, se coloca sobre la superficie del agar un disco de cefoxitin de 30µg y junto al este se coloca el disco de Tris EDTA sobre el cual se colocan varias colonias del microorganismo a probar. Se incuba en aerobiosis a 35ºC con la placa invertida.
    Resultado positivo: Se observa un aplastamiento o hendidura en la zona de inhibición cerca al disco de cefoxitin, indicando inactivación de la enzima. Esta prueba proporciona una detección confiable de AmpC mediada por plásmido en organismos gram negativos como son K. pneumoniae, Salmonella, spp y P mirabilis. Esta prueba no es muy confiable para aislamientos de E. coli debido a que este microorganismo puede tener AmpC mediada por plásmidos y por cromosoma.

    Prueba con Agar suplementado con Cefoxitín:
    Esta prueba permite la diferenciación de AmpC de otros mecanismos de resistencia en bacterias como K. pneumoniae y E. coli.
    Para esta prueba se parte de un cultivo fresco del microorganismo en tripticasa de soya, el cual se centrifuga para tener un extracto de la enzima y posteriormente se realiza un proceso de congelación y descongelación.
    Para realizar esta técnica se utiliza el Agar Mueller Hinton con diferentes concentraciones de Cefoxitin (2, 4, 8 y 16 µg/mL), las placas son inoculadas previamente con E. coli ATCC 25922. Sobre la superficie del agar se hacen pozos circulares de 5mm de diámetro y se coloca 30 µL del extracto de las células de la muestra en el interior del pozo. Se incuban las placas por 18-24horas a 35°C.
    Una zona de crecimiento alrededor de la periferia del pozo es considerada positiva para la presencia de AmpC

    5. c. inducible - constitutiva


    LUISA MARIA NOGUERA HERNANDEZ 10172034

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    1. como no esta dentro del grupo de las Ampc la manera de haber recibido la expresión genética es por un estimulo. El resto de las respuestas bien.

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  23. 1. A
    2. C
    3. C
    4. Existen pruebas fenotípicas para la detección de BLEE, que dependen de su expresión fenotípica y está condicionada por la cantidad de enzima de la bacteria y de la presencia o ausencia de otros mecanismos de resistencia. la mayoría de estas pruebas se basa en la capacidad inhibitoria del ácido clavulánico, ya que estas enzimas son inhibidas por el ácido clavulánico y no presentan actividad hidrolitica frente a la cefoxitina por lo tanto las cepas en el antibiograma se presentan sensibles antes este antimicrobiano. entre ellas se destaca la técnica de difusión en disco en la que la presencia de una BLEE se sospecha no solo por la resistencia o disminución de los halos de inhibición de algunos o todos los sustratos sino también por el efecto sinérgico producido entre las cefalosporinas de espectro amplio o los monobactamicos y el ácido clavulanico, cuando previamente se han situado de forma estratégica los discos.

    5. C

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  24. YESENIA ALEJANDRA MEDINA MOLINA
    CODIGO:10171051
    CASO CLINICO
    1. A. Klebsiella pneumoniae
    2. B. Cefalosporinasas, Carbapenemasa
    3. C. cefepime y Meropenem.
    4. Nombre si hay otra prueba que detecte o confirme el mecanismo de resistencia:
    otra prueba que nos confirma el mecanismo de resistencia es el Metodo de Hodge modificado que se se realiza para confirmar que el mecanismo de resistencia de la bacteria a los antimicrobianos del grupo carbapenémicos es debido a la presencia de la enzima carbapenemasa.

    5.C inducible/constitutiva

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  25. 1. Klebsiella pneumoniae.
    2.Cefalosporiasa, carbapenemasas.
    3. Cefepime y Meropenem.

    4.El Test de Hodge modificado se realiza para confirmar que el mecanismo de resistencia de la bacteria a los antimicrobianos del grupo carbapenémicos es debido a la presencia de la enzima carbapenemasa.

    Fundamento:
    Capacidad que tiene la enzima (Carbapenemasa) de hidrolizar al antimicrobiano favoreciendo así el crecimiento de ésta e inhibiendo el efecto del mismo.





    Técnica:
    A partir de una cepa control de E. coli ATCC 25922
    Realizar una suspensión 0.5 Mac Farland de la cepa control (E. coli ATCC 25922).
    Hacer una dilución 1/10 de dicha suspensión en agua destilada o solución salina.
    Inocular con ella una placa de Mueller-Hinton siguiendo las recomendaciones para técnica de difusión en disco.
    Colocar en el centro de la placa un disco de Imipenem (10 microgramos).
    Con un asa estéril tome de 3 ó 4 colonias de la muestra objeto de estudio y realice una estría desde el borde a la placa hacia el centro de la misma sin llegar a tocar el disco de IMP.
    Incubar en aerobiosis a 37ºC / 24 horas
    Es conveniente realizar junto a la muestra controles positivos negativos.
    En una misma placa no se recomienda realizar más de 5 ensayos.

    Interpretación de los resultados:
    Positivo: Un resultado positivo se pondrá de manifiesto por el crecimiento de la cepa E. coli ATCC 25922 en la parte de intersección entre el halo de inhibición que genera la difusión del antibiótico y la estría de la cepa que era objeto de nuestro estudio, formándose así una hendidura en la parte próxima al disco. Ésto pone en evidencia la presencia de carbapenemasas en la cepa problema que han sido liberadas al medio permitiendo así el crecimiento de E. coli.
    Negativo: No se presenta crecimiento de E.coli en el punto de intersección de la estría de la cepa problema y el halo del inhibición del antimicrobiano, es decir, se aprecia un halo de inhibición perfecto alrededor del disco.

    5.Inducible-modificable.

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  26. 1. A
    2. C
    3. C
    4. El Test de Hodge modificado se realiza para confirmar que el mecanismo de resistencia de la bacteria a los antimicrobianos del grupo carbapenémicos es debido a la presencia de la enzima carbapenemasa.


    5. B

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    1. El microorganismo es una K.pneumoniae con un mecanismo de resistencia de un Ampc ya que es sensible al cefepime su confirmación se realiza con ácido fenil borónico y lo adquiere solo por un estimulo por lo tanto su expresión genética es inducible .

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  27. 1. Según los resultados de la bioquímica con sus características, la muestra biológica, y el resultado del antibiograma el microorganismo corresponde a:
    a. Klebsiella pneumoniae

    2. De los siguientes mecanismos cual(es) presenta el microorganismo resistencia antimicrobiana
    c. Carbapenemasa , BLEE

    3. Cuáles son los antibióticos indicativos que representa el mecanismo de la resistencia antimicrobiana
    c. Cefepime y Meropenem

    4. Nombre si hay otra prueba que detecte o confirme el mecanismo de resistencia
    El Test de Hodge modificado: se realiza para confirmar que el mecanismo de resistencia de la bacteria a los antimicrobianos del grupo carbapenémicos es debido a la presencia de la enzima carbapenemasa.

    Fundamento:
    Capacidad que tiene la enzima (Carbapenemasa) de hidrolizar al antimicrobiano favoreciendo así el crecimiento de ésta e inhibiendo el efecto del mismo.

    Técnica:
    A partir de una cepa control de E. coli ATCC 25922

    Realizar una suspensión 0.5 Mac Farland de la cepa control (E. coli ATCC 25922).
    Hacer una dilución 1/10 de dicha suspensión en agua destilada o solución salina.
    Inocular con ella una placa de Mueller-Hinton siguiendo las recomendaciones para técnica de difusión en disco.
    Colocar en el centro de la placa un disco de Imipenem (10 microgramos).
    Con un asa estéril tome de 3 ó 4 colonias de la muestra objeto de estudio y realice una estría desde el borde a la placa hacia el centro de la misma sin llegar a tocar el disco de IMP.
    Incubar en aerobiosis a 37ºC / 24 horas
    Es conveniente realizar junto a la muestra controles positivos negativos.
    En una misma placa no se recomienda realizar más de 5 ensayos.

    Interpretación de los resultados:
    Positivo: Un resultado positivo se pondrá de manifiesto por el crecimiento de la cepa E. coli ATCC 25922 en la parte de intersección entre el halo de inhibición que genera la difusión del antibiótico y la estría de la cepa que era objeto de nuestro estudio, formándose así una hendidura en la parte próxima al disco. Ésto pone en evidencia la presencia de carbapenemasas en la cepa problema que han sido liberadas al medio permitiendo así el crecimiento de E. coli.
    Negativo: No se presenta crecimiento de E.coli en el punto de intersección de la estría de la cepa problema y el halo del inhibición del antimicrobiano, es decir, se aprecia un halo de inhibición perfecto alrededor del disco.

    Metodo de Doble Disco : Se realiza como el método convencional de difusión en agar, en placas de Agrar de Müeller Hinton con inóculo Mac Farland 0.5 y ensayando 4 discos: CFZD, CFZD + AC, CFTX y CFTX + AC. Se incuba en atmósfera normal durante 16 a 18 hrs a 37°C. se miden los halos de inhibición de forma convencional. El aumento del halo en mas de 5 mm con los discos conteniendo la mezcla de cefalosporina y AC en relación al disco de cefalosporina sola, para las dos o al menos uno de las dos cefalosporinas (CFZD o CFTX), se considera confirmatorio a la presencia de BLEE.
    5. De las siguientes expresiones cuál es la que utilizo la bacteria para presentar el mecanismo de resistencia.
    c. Inducible-constitutiva
    Richard Crespo P.
    10172324

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  28. 1.segun la bioquimica klebsiella pneumonie
    2.cefalosporinasa, carbapenemasas
    3.cefepime y meropemen
    4.para confirmar el mecanismo de resistencia se debe realizar:
    TEST DE HODGE MODIFICADO
    La prueba confirmatoria se realiza de acuerdo a las siguientes recomendaciones:

    -Prepare una suspensión de una cepa de E. coli ATCC 25922, realice una suspensión 0.5 Mcfarland y haga una dilución 1:10 en agua destilada o solución salina

    -Extienda el inóculo sobre la superficie del agar Mueller-Hinton siguiendo las recomendaciones del CLSI para las pruebas de rutina de difusión en disco

    -Coloque un disco de meropenem en el centro del agar

    -Tome de 3 a 5 colonias de un cultivo fresco del microorganismo a probar y realice una estría desde el borde del disco hacia la periferia, la longitud puede ser de 20-25 mm

    -Incube a 35ºC en aerobiosis durante 16-18 horas

    Un resultado positivo se evidencia por el crecimiento de la cepa de E. coli en la parte de intersección entre el halo de inhibición generado por la difusión del antibiótico y la estría de la cepa problema formando una hendidura en la parte proximal al disco.

    No se presenta crecimiento de E. coli
    en el punto de intersección de la estría de la cepa problema y el halo de inhibición generado por el carbapenem

    5.INDUCIBLE/ CONSTITUTIVA seria la expresion para este mecamismo de resistencia

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  29. El microorganismo es una K.pneumoniae con un mecanismo de resistencia de un Ampc ya que es sensible al cefepime su confirmación se realiza con ácido fenil borónico y lo adquiere solo por un estimulo por lo tanto su expresión genética es inducible .

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